FlashPure Universal Genomic DNA Kit

血液/細(xì)胞/組織/鼠尾/細(xì)菌基因組 DNA 提qu試劑盒

（離心柱型）

血液/細(xì)胞/細(xì)菌基因組DNA快速提取試劑盒 

目錄號(hào):40110

產(chǎn)品內(nèi)容：

自備試劑：

無(wú)水乙醇，RNase A（可選），溶菌mei（用于革蘭氏陽(yáng)性菌，可選）

保存條件：

室溫（15~25℃）

蛋白酶 K，室溫可保存 6 個(gè)月，4℃保存 12 個(gè)月，~ 20℃保存 2 年。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

適用于從血液、培養(yǎng)細(xì)胞、動(dòng)物組織、植物組織、鼠尾、細(xì)菌等樣本中快速提取高質(zhì)量的基因組DNA。

本試劑盒采用du特的裂解液，利用硅膠膜特異吸附DNA，無(wú)需酚氯仿等有毒試劑，也無(wú)需進(jìn)行耗時(shí)的醇類沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性雜質(zhì)，得到基因組DNA，無(wú)蛋白、核酸酶污染，可直接進(jìn)行PCR、酶切和雜交等相關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

產(chǎn)品特點(diǎn):

1. 簡(jiǎn)便快速：30 min 內(nèi)可獲得高純度的基因組 DNA。

2. 安全無(wú)毒：無(wú)需苯fen/氯仿抽提。

3. 高產(chǎn)：典型的產(chǎn)量 200µl 全血可提取出 3～6µg 基因組 DNA，

4. 高純：OD260/280=1.7～1.9，長(zhǎng)度可達(dá) 30～50 kb，可直接進(jìn)行 PCR、酶切和雜交等分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng):

1. 如果裂解液TL、結(jié)合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，搖勻后使用。

2. 開始實(shí)驗(yàn)前將需要的水浴先預(yù)熱到70℃?zhèn)溆谩?/span>

3. 為了優(yōu)良效guo，最好使用新鮮血液標(biāo)本或者4℃存放少于3天的標(biāo)本，不要使用反復(fù)凍融超過(guò)3次的標(biāo)本，否則會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量，不同樣品尤其疾病樣品中白細(xì)胞數(shù)量差異可能非常大，因此產(chǎn)量的個(gè)體差異也可能非常大。

操作步驟:

第一次使用前，請(qǐng)先在漂洗液 WB 中加入指ding量無(wú)水乙醇，詳見瓶身的標(biāo)簽。提示：所有離心步驟必須在室溫（15~25℃）下進(jìn)行。

1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液，12,000 rpm 離心 1 min，棄濾液，將吸附柱重新放回收集管中。

（請(qǐng)使用當(dāng)天處理過(guò)的柱子）

2. 材料處理：

a. 血液

取 200 μl 新鮮、冷凍或加入各種抗凝劑的血液，放入 1.5 ml 離心管。

▲如果全血起始量小于200 μl，則用1× PBS補(bǔ)足到200 μl。

如果起始量介于300 μl~1 ml之間，則需要先進(jìn)行紅細(xì)胞裂解操作: 在樣品中加入3倍體積紅細(xì)胞裂解液顛倒混勻，室溫放置10 min，期間再顛倒混勻幾次。13,000 rpm離心20 sec(對(duì)于1.5 ml離心管)或2,000 ~ 3,000 rpm離心5 min(對(duì)于15 ml離心管)，吸去上清，留下白細(xì)胞沉淀（如果看到的是大部分的紅色細(xì)胞團(tuán)，則再次重復(fù)上述紅細(xì)胞裂解步驟），加入 200 μl 1× PBS，振蕩至che底懸浮。

▲如果處理血樣為禽類、鳥類、兩棲類或更低級(jí)生物的抗凝血液，其紅細(xì)胞為有核細(xì)胞，因此處理量?jī)H用5 ~ 20 μl，可加1× PBS 補(bǔ)足到200 μl后，進(jìn)行下面的裂解步驟。

b. 培養(yǎng)細(xì)胞

① 105 ~ 106 懸浮細(xì)胞到一個(gè)1.5 ml 離心管；對(duì)于貼壁細(xì)胞，應(yīng)該先用胰蛋bai酶消化后吹打下來(lái)收集。

②  13, 000 rpm 離心 10 sec，吸棄上清，留下細(xì)胞團(tuán)。

③ 加入 200 μl 1× PBS 重懸洗滌細(xì)胞，13, 000 rpm 離心 10 sec，wan全吸棄上清。

④ 再次加入 180 μl 1× PBS，振蕩混勻，使細(xì)胞che底懸浮。

c. 動(dòng)物組織、植物組織（例如鼠肝腦或者植物葉片）

將 20 ~ 50 mg（脾組織用量應(yīng)少 10 mg）新鮮或者解凍的組織用

解剖dao切成小碎塊（切成小塊可以提高產(chǎn)量）或者在液氮中研磨組

織成細(xì)粉后，轉(zhuǎn)入裝有 180 μl 組織裂解液 TL 的 1.5 ml 離心管中，

用大口徑槍頭吹打混勻。

d. 鼠尾

將 0.2 ~ 0.5 cm 的鼠尾巴尖(即 20 ~ 50 mg)剪碎（一定要剪 0 ~ 2cm范圍內(nèi)的尾巴尖，否則裂解效果不好），或者在液氮中研磨成細(xì)粉后，轉(zhuǎn)入裝有 180 μl 裂解液 TL 的 1.5 ml 離心管中，用大口徑槍頭吹打混勻。

e. 細(xì)菌

① 取 0.5 ~ 2 ml 培養(yǎng)菌液（最多不超過(guò) 2×109 個(gè)細(xì)胞），10, 000 rpm，

離心 30 sec，盡可能的吸棄上清，收集菌體。

▲起始處理量可以根據(jù)細(xì)菌密度、細(xì)胞種類、預(yù)期產(chǎn)量進(jìn)行調(diào)整，但是離心吸附柱最大吸附能力是 30 μg 基因組 DNA，如果菌體過(guò)量超過(guò)最大吸附能力，反而會(huì)嚴(yán)重降低產(chǎn)量。

② 加入 200 μl 1× PBS 重懸，10, 000 rpm 離心 30 sec，吸棄上清。

將細(xì)胞振蕩或者吹打充分重懸于 180 μl 1× PBS 中。

▲注意：對(duì)于較難破壁的革蘭氏陽(yáng)性菌，可略過(guò) b 步驟，加入溶菌mei進(jìn)行破壁處理，具體方法為：加入 180 μl 緩沖液(20 mM Tris, pH 8.0； 2 mM Na2-EDTA；1.2% Triton X~100；臨用前加入終濃度為 20 mg/ ml 的溶菌mei(溶菌mei必須用溶菌mei干粉溶解在緩沖液中進(jìn)行配制，否則會(huì)導(dǎo)致溶菌mei無(wú)活性))，37℃處理 30 min 以上。

3. 加入 20 μl 蛋白酶K 溶液，充分混勻。

a. 提取血液基因組時(shí)，只需加入 Proteinase K 混勻，即可進(jìn)行下一步。

b. 提取細(xì)胞基因組時(shí)，只需加入 Proteinase K 混勻，即可進(jìn)行下一步。

c. 提取動(dòng)物組織、植物組織的基因組時(shí)，加入Proteinase K混勻后，在 56℃放置 1~3 小時(shí)，每小時(shí)顛倒混合樣品 2~3 次，直至組織wan全消化溶解，再進(jìn)行下一步。

d. 提取鼠尾基因組時(shí)，加入 Proteinase K 混勻后，在 56℃放置 3 小時(shí)（也可以過(guò)夜消化），每小時(shí)顛倒混合樣品 2~3 次，直至組織wan全消化溶解，再進(jìn)行下一步。

e. 提取細(xì)菌基因組時(shí)，只需加入 Proteinase K 混勻，即可進(jìn)行下一步。

4. （可選步驟）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振蕩混勻，室溫放置 5 ~ 10min。

5. 加入200 μl 結(jié)合液CB，充分振蕩混勻，70℃水浴或金屬浴處理10 min。

6. 冷卻后加 100 μl 無(wú)水乙醇 (或異丙醇)，充分振蕩混勻，此時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀，短暫離心以去除管蓋內(nèi)壁水珠。

7. 將所得溶液和絮狀沉淀加入一個(gè)DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）13, 000 rpm 離心 1 min，DNA 被吸附在膜上，倒棄濾液。

8. 加入 500 μl 抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。

9. 加入 600 μl 漂洗液 WB（請(qǐng)檢查是否已加入無(wú)水乙醇），13, 000 rpm離心 30 sec，倒棄濾液。

10. 重復(fù)步驟 9 一遍。

11. 將 DNA 吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 離心 2 min，盡量除去漂洗液，以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

12. 取出 DNA 吸附柱，放入一個(gè)干凈的 1.5 ml 離心管中，向吸附膜的中央加入 100 μl 洗脫緩沖液 EB （洗脫緩沖液事先在 80 ~ 100℃水浴中預(yù)熱可以提高產(chǎn)量），室溫放置3 ~ 5 min，13, 000 rpm 離心1min。

▲可將第一次洗脫所得溶液重新加入離心柱中，室溫放置 2 min，13, 000 rpm離心1min?？梢蕴岣邼舛?0%左右。

13. DNA 可以存放在~ 20℃，如果要長(zhǎng)時(shí)間存放，可以放置在~70℃。

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