諾博萊德 細(xì)菌膜蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

NobleRyder P5007 細(xì)菌膜蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品貨號(hào)：P5007

產(chǎn)品名稱：細(xì)菌膜蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格：50T/100T

細(xì)菌膜蛋白 胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

中文名稱：細(xì)菌膜蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

規(guī)格：100T ; 50T

儲(chǔ)存條件：2-8℃，1 year

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

細(xì)菌膜蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒可以從各種菌體中提取膜蛋白和胞質(zhì)蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。本試劑盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gelshift凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。本試劑盒中不含有EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

適用樣本：細(xì)菌

注：

1. 蛋白酶抑制劑未開蓋使用前也可以2-8℃儲(chǔ)存。開蓋使用后-20℃儲(chǔ)存。

2. 蛋白酶抑制劑在2-8℃低溫時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

3. 試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完！

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

細(xì)菌膜蛋白/胞質(zhì)蛋白提取試劑盒可以從各種菌體中提取膜蛋白和胞質(zhì)蛋白。提取過(guò)程簡(jiǎn)單方便。本試劑盒含有的du特配方能夠有效溶解細(xì)胞膜組份，試劑盒含有蛋白酶抑制劑混合物，阻止了蛋白酶對(duì)蛋白的降解，為提取高質(zhì)量的蛋白提供了保證。

本試劑盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫沉淀、ELISA、轉(zhuǎn)錄活性分析、Gel shift 凝膠阻滯實(shí)驗(yàn)、酶活性測(cè)定等下游蛋白研究實(shí)驗(yàn)。本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒提取的蛋白為具有天然蛋白構(gòu)象的活性蛋白。

本試劑盒中不含有 EDTA，與金屬螯和層析等下游應(yīng)用兼容。

本試劑盒提取的蛋白樣本含有高濃度的鹽成分，不可直接用于 2D 電泳，如下游實(shí)驗(yàn)需要直接用于等電聚焦、雙向電泳，請(qǐng)使用其他貨號(hào)的試劑盒。也可以將最后樣品除鹽后再用于 2D 電泳，用脫鹽柱脫鹽處理。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、使用方便，從細(xì)菌中提取蛋白不需經(jīng)過(guò)超聲破碎等前處理。

2、含蛋白穩(wěn)定劑，提取的蛋白穩(wěn)定。

3、紫外檢測(cè)蛋白濃度時(shí)，背景干擾低。

4、蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制劑配方優(yōu)化。蛋白酶抑制劑混合物包含

6 種獨(dú)立的蛋白酶抑制劑；每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優(yōu)化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性，包括si氨酸蛋白酶、半guang氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

5、本品可用于革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。

6、本品不含 EDTA，可以用于金屬螯合層析等下游應(yīng)用。

自備試劑和儀器：

離心機(jī)、振蕩器、渦旋混勻器、移液器、冰箱、冰盒，PBS 緩沖液、蛋白定量試劑盒，離心管、吸頭、一次性手套

使用方法：

一、使用注意事項(xiàng)：

1. 旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開蓋時(shí)液體灑落。

2. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

3. 蛋白酶抑制劑儲(chǔ)存期間溶液如果出現(xiàn)沉淀，不影響使用，溶解后正常使用。

4. 蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài)，從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴，變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。

5. 提取液 A 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

6. 可以根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)需要加入其它蛋白酶抑制劑單品。

二、操作步驟

1. 提取液制備：

每 500ul 冷的提取液 A 中加入 5ul 提取液 B 和 2ul 蛋白酶抑制劑混合物，充分混勻后置冰上備用。

【注】：

1) 根據(jù)需要處理的樣品數(shù)量準(zhǔn)備蛋白提取液，蛋白酶抑制劑混合物不可以一次全部加入提取液。

2) 加過(guò)蛋白酶抑制劑的提取液一周內(nèi)未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制劑。

3) 蛋白樣品用于測(cè)定某些蛋白酶活性等下游實(shí)驗(yàn)時(shí)，注意根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整抑制劑混合物是否加入。

4) 提取液 A 在使用前須一直置于 2-8℃條件，否則下游膜蛋白提取時(shí)會(huì)導(dǎo)致不容易分層。

5) 以下步驟中使用的蛋白提取液為此步配制好的含蛋白酶抑制劑的提取液。

2. 離心收集菌體，用 PBS 洗菌體 2 次。

【注】：

1) 加入 PBS 重懸混勻，5000×g 離心 10 分鐘。

2) 不同菌種需要的離心力有差異，可以根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整離心力，采用平時(shí)收集菌體的轉(zhuǎn)速即可。

3. 按每 100-150mg 濕重菌體樣本加入 500ul 冷的提取液 A（大約菌體和提取液體積比 1:3-1:5，wan全淹沒(méi)菌體即可），吹打混勻，在 2-8℃振蕩 1-2 小時(shí)，至菌體裂解wan全，液體澄清，菌體沉淀減少。

【注】：

1) 必須在 2-8℃條件下振蕩。不可以室溫振蕩

2) 使用振蕩器或搖床的較低轉(zhuǎn)速，保持液體稍微晃動(dòng)即可?？梢陨w緊離心管，將離心管傾斜放置或者橫置，以利于液體振蕩。

3) 如果沒(méi)有 2-8℃持續(xù)振蕩條件，也可直接置 2-8℃冰箱靜置 1-2 小時(shí)，中間每隔 10 分鐘渦旋振蕩混勻即可。

4) 如果有超聲條件，可以在 40-300w，超聲 5s/間隔 5s 條件下超聲幾分鐘，至澄清。超聲有利于提高膜蛋白回收率。

4. 將菌液在 2-8℃低溫下 12000×g 離心 5 分鐘，取上清。

5. 在 37℃水浴 10 分鐘。

6. 在 37℃，1000×g 離心 3 分鐘。

【注】：

1) 此步驟必須 37℃條件下離心。

2) 如果離心機(jī)不可控溫，可以不離心，延長(zhǎng)上一步驟水浴時(shí)間，至溶液分層清晰即可?；蛘咴谑覝貤l件下離心，縮短離心時(shí)間至 1 分鐘。

7. 此時(shí)液體分為 2 層，小心移除上層溶液，即得到胞質(zhì)蛋白。

8. 留管底部下層，大約 50ul 液體。

【注】：

1) 下層為粘稠狀液體。

2) 未wan全分好層時(shí)看上去可能像 3 層，保留中間的界面層即可。

9. 用 50-200μl 冷的膜蛋白溶解液溶解該下層溶液，即得細(xì)菌膜蛋白樣品。

【注】：

1) 膜蛋白比較難溶解，不能很快溶解混勻，可以在加入溶解液后稍微吹打混勻，然后置于 4℃冰箱靜置至溶解。中途用移液器輕輕吹打混勻一次。靜置后取出再次用移液器稍微吹打混勻即可。

2) 靜置直至管底透明膠狀物wan全溶解。

10. 將上述蛋白提取物定量后分裝于-80℃冰箱保存?zhèn)溆没蛑苯佑糜谙掠螌?shí)驗(yàn)。

【注】：

1) 建議用 BCA 法進(jìn)行蛋白定量。

2) 蛋白樣品-80℃存放一年沒(méi)有問(wèn)題。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被細(xì)菌污染。

注意事項(xiàng)：

1. 正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得優(yōu)良實(shí)驗(yàn)效果。

2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時(shí)試劑損失。

3. 禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4. 樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5. 最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并che底清除殘留清潔劑。

6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

細(xì)菌膜蛋白 胞質(zhì)蛋白提取試劑盒

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